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氟苯尼考酯(钠)对肉仔鸡致病性大肠杆菌的治疗试验

2015/12/10 9:42:19 0人评论 1407次浏览 分类:药物使用指导

    近几年,商品肉鸡养殖规模迅速发展,但由于饲养条件较差等原因,肉仔鸡大肠杆菌病发病率明显上升,鉴于大肠杆菌的耐药性日趋严重,目前很多抗菌药物都不能有效控制鸡群的大肠杆菌病。而氟苯尼考仍然是目前临床上治疗禽大肠杆菌的有效药物,但氟苯尼考不溶于水,现在临床上用的水溶性氟苯尼考有效成分含量低,效果不理想,且治疗成本高。

  氟苯尼考酯(钠)为氟苯尼考第二代产品,溶水速度快,进入动物体后通过机体代谢生物活性增强,为此,笔者进行了本试验,以确定氟苯尼考酯(钠)在治疗禽大肠杆菌感染的实际应用效果。

  一、材料和方法
  
  (一)试验材料

  试验药物 氟苯尼考酯(钠)原粉(含量98%)由山东济南慧萌生物科技有限公司提供;10%水溶性氟苯尼考原粉由山东省某制药有限公司生产提供。

  试剂 营养肉汤液体培养基、麦康凯营养琼脂均购自购自北京陆桥技术有限公司公司。

  试验仪器 420-型电热恒温培养箱、SW-WJ-LCU-洁净工作台、YXQG02-型电热式蒸汽消毒器、电子天平、常用玻璃器皿等。

  试验动物 240只1日龄罗斯308商品肉仔鸡,购自山东临沂康华孵化厂。试验用小白鼠(18±3克)240只,购自山东省临沂卫生学校医学实验动物中心。

  试验菌种  鸡大肠杆菌078(购自中国兽药监察所);鸡大肠杆菌(临沂株),系经过鉴定的临床分离株,由临沂师范学院农林学院动物预防医学实验提供。

  (二)试验方法

  菌种及其特性检查 试验菌种为鸡大肠杆菌078标准株和鸡大肠杆菌(临沂株),取冻干标准菌株及鸡大肠杆菌(临沂株),分别无菌操作启封后接种于麦康凯琼脂平板,37℃培养18~24小时后,形成紫红色、直径为1毫米左右的圆形菌落,触片革兰氏染色后,镜检为小的杆状G-细菌。
  试验菌液制备 合格菌种接种麦康凯琼脂平板,37℃培养18~24小时,钓取典型菌落接种于肉汤培养基中,37℃培养18~24小时后取出,肉汤培养物接种肉仔鸡复壮,从死鸡肝脏中无菌操作分离大肠杆菌并重新接种麦康凯琼脂平板培养后,再钓取典型菌落接种于肉汤中,37℃培养18~24小时,用菌落平板计数法测定其生长浊度,达108CFU/毫升以上者作为试验菌液。

  试验分组与接种 将试验肉仔鸡和小白鼠各随机分为八个组,分别为鸡大肠杆菌078菌株和鸡大肠杆菌(临沂株)试验Ⅰ、Ⅱ组、感染对照组和空白对照组。肉仔鸡试验Ⅰ、Ⅱ组和感染对照组每只雏鸡胸部肌肉注射试验用菌液(鸡大肠杆菌078或鸡大肠杆菌临沂株)0.5毫升,空白对照组胸部肌肉注射等剂量的生理盐水;小白鼠试验Ⅰ、Ⅱ组和感染对照组每只小白鼠腹腔注射试验用菌液0.5毫升,空白对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。

  记录接种前后鸡只和小白鼠的精神状态、食欲变化、粪便性状等,死亡取鸡或小白鼠取肝、脾及心脏进行细菌分离培养。试验期间全封闭隔离饲养,定期常规消毒,饲喂不含任何抗菌药物的全价饲料,自由采食和饮水,预饲至10日龄进入正式试验。

  药液配制 无菌称取氟苯尼考酯(钠)和10%水溶性氟苯尼考原粉,氟苯尼考酯(钠)按30毫克/升溶于无菌的生理盐水中配成注射液;10%水溶性氟苯尼考按300毫克/升溶于无菌的生理盐水中配成溶液备用。

  治疗试验 接种后5~12小时肉仔鸡和小白鼠开始出现明显的临床症状,此时开始给药,试验Ⅰ组用滴管按30毫克/千克口服氟苯尼考酯(钠)溶液,试验Ⅱ组用滴管按300毫克/千克口服氟苯尼考溶液,感染对照组和空白对照组口服等量的生理盐水,不用药。各组按每12小时给药1次,连用3天。接种后6天内,每天观察肉仔鸡和小白鼠的各种临床表现,剖检死亡肉仔鸡和小白鼠,做细菌分离培养以确定死因,并记录每只肉仔鸡和小白鼠试验前后的变化情况。

  疗效判定标准   治愈:凡在试验期间经治疗,症状消失。粪便、饮食欲及精神恢复正常,为治愈。

  有效:除完全治愈的致病试验肉鸡和小白鼠为有效外,凡试验期间未死亡,并且症状明显减轻,粪便、精神、饮食欲有好转,可判为有效。
  无效或死亡:凡在试验期间出现大肠杆菌典型腹泻症状。经治疗其症状无好转或死亡,剖检及细菌培养鉴定为大肠杆菌感染,可判为无效或死亡。

  疗效评价指标 包括死亡率、治愈率、有效率、无效率和治疗成本。用生物统计学方法对各数据进行χ2检验。

  二、试验结果及分析

  临床症状 接种鸡大肠杆菌后1~5天,感染对照组30只肉仔鸡相继发病死亡。其主要临床症状是精神沉郁食欲、饮欲下降或废绝,羽毛蓬乱,两翼下垂,头颈萎缩,闭眼昏睡,不愿走动,离群呆立,排白色稀粪,严重者甚至卧地不起。

  剖检特征为:肝脏充血、肿大易碎,肝浆膜增厚,有大量渗出物;脾肿大;心包腔内有大量纤维素性渗出物。从肝、脾及心脏中均可回收到原接种菌,证明接种菌对肉仔鸡均具有较强的致病性。空白对照组肉仔鸡饲养至6天均健康存活。

  感染对照组小白鼠于12~67小时相继发病死亡。而空白对照组小鼠饲养至6天均健康存活。死亡鼠剖检变化典型,可见其胃肠膨胀,肠腔内充满黄色水样稀便。用肝和心包液接种麦康凯琼脂平板可回收到原接种菌。证明接种菌对小白鼠均具有较强的致病性。

  治疗试验结果 治疗结果下见表。

   治疗试验结果表

     氟苯尼考酯(钠)对鸡大肠杆菌O78和鸡大肠杆菌(临沂株)致病肉仔鸡平均治愈率为90%、有效率为100%,对致病小白鼠平均治愈率为86.7%、有效率为96.7%;10%水溶性氟苯尼考对鸡大肠杆菌O78和鸡大肠杆菌(临沂株)致病肉仔鸡平均治愈率为83.4%、有效率为96.7%,对治病小白鼠平均治愈率为81.8%、有效率为95%。说明氟苯尼考酯(钠)治疗肉鸡大肠杆菌感染和小白鼠大肠杆菌感染的治愈率优于10%水溶性氟苯尼考,差异显著(P<0.05);但氟苯尼考酯(钠)治疗肉鸡大肠杆菌感染和小白鼠大肠杆菌感染的有效率与10%水溶性氟苯尼考比较差异不显著(P>0.05)。

  治疗成本  氟苯尼考酯(钠)和10%的水溶性氟苯尼考试验期间市场价格每千克分别为860元和90元人民币,按治疗有效含量30毫克/千克体重计算,使用氟苯尼考酯(钠)每100千克体重一次用药可节省0.1元左右。

  三、小结

  1.从本次试验结果来看,氟苯尼考酯(钠)对肉仔鸡大肠杆菌感染治愈率优于10%水溶性氟苯尼考,差异显著(P<0.05),有效率亦优于10%水溶性氟苯尼考。说明氟苯尼考酯(钠)在体内吸收良好,且用药成本低,值得临床推广应用。

  2.氟苯尼考不溶于水,临床治疗用药受到一定的限制。研究者虽然推出了许多氟苯尼考专用助溶溶剂,但在使用中仍存在一些问题。如低温下溶解速度较慢或已配好的溶液有氟苯尼考沉淀,用有机溶剂助溶的氟苯尼考溶液在集团化养殖场运用时,常因析出沉淀造成饮水器阻塞,给规模化养殖带来极大不便。

  氟苯尼考酯(钠)采用化学合成法将氟苯尼考制成无活性的前体,溶水速度快,进入动物体内后通过机体代谢生物活性增强,从而发挥有效的治疗作用。

  3.氟苯尼考使用助溶剂可以制成注射制剂,但在使用中仍存在一些问题。如溶解过程中若有水的存在,氟苯尼考将会析出,溶液变混浊。有机溶剂的添加还提高制剂成本。 
  (作者简介:王尽波,男, 山东省临沂师范学院农林学院2007级动物医学本科学生)

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